水解酶中的超级明星—固定化CALB酶

CALB酶和固定化CALB酶


CALB酶是来源南极假丝酵母的脂肪酶B,可以在毕赤酵母中发酵表达得到;固定化CALB酶为CALB酶通过疏水作用物理吸附特定树脂上而得到的固定化酶。


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(固定化CALB酶分子图示)

CALB酶研究发展史


CALB酶最早发现于南极假丝酵母。1972 年Huibert 用交联法制备稳定性好且溶于水的CALB酶,交联剂是目前已广为使用的戊二醛。1980年Yoneyama发明了酶的固定化方法:采用水溶性的载体在酶未完全溶解的情况下用物理吸附的方法固定化CALB酶。这种方法的优点在于固定化酶的活性高,而且载体可以回收重复使用。基于以上的成果,丹麦的诺和诺德公司发明了其自主的CALB的固定化方法。1994年Uppenberg等解析出CALB酶的三维立体结构和氨基酸顺序。1995年CALB酶被成功克隆,并在米曲霉Aspergillns oryzae里实现表达,诺和诺德公司获得此项专利。2003年丹麦的Weera Piyatheerawong等通过Novozyme 435(诺维信公司固定化的CALB产品)酶法应用于合成实验,实验结果表明CALB的催化效果好, 在水含量0. 1%的体系中反应4 h即可达到接近100%的转化率。


固定化CALB酶应用


通过近十几年研究成果表明,固定化CALB酶能在水相或有机相中高效催化酯的合成、酯水解、酯交换、内酯开环聚合、胺解反应、酰胺的水解与合成及加成反应、双键环氧化反应等,可达到反复套用的效果,具有较强的手性选择性及位置选择性,是脂质生物催化领域的"超级明星",被广泛应用于医药、食品等领域各类脂质的催化反应。目前市场上有不少在售的固定化CALB酶产品,例如:诺维信的Novozyme 435和尚科生物的CALB-IMMO-100等。


尚科固定化CALB-IMMO-100


2017年尚科生物医药(上海)有限公司成功开发出经过基因改造的固定化CALB酶产品:CALB-IMMO-100。尚科生物固定化CALB酶具有以下特点:


  ①  稳定性好,可以室温储存;
  ②  在水相和非水相中催化,均有非常好的性能表现;
  ③  操作方便,易于分离,避免蛋白质对产品的污染;
  ④  可以多次反复套用,有效降低使用成本;


与市面上的Novozyme 435酶相比,尚科生物的CALB-IMMO-100酶具有酶活高,性价比高等优势。


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1、胺解反应示例(1) 

 

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2、胺解反应示例(胺的手性拆分)(2)


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3、内酯开环聚合反应示例(3)

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4、酯交换反应示例(羟基位置选择性)(4)


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5、酯交换反应示例(醇的手性拆分)(5)

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6、酯合成反应示例(酸的手性拆分)(6)


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7、酯水解反应示例(手性拆分)(7)

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8、酰胺水解反应示例(8)

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9、酰胺合成反应示例(9)

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10、加成反应示例(10)

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责任编辑:白芨


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