在药品分析方法建立和验证的过程中，准确度验证是其中极为重要的一项。作为分析人员，你是否会遇到回收率实验总不合格，结果忽高忽低？这也许是杂质溶解性在作怪！以下是我在实际工作过程中对于方法建立、化合物溶解性与回收率方面的一些心得，与大家分享。

对于方法建立起初需要对化合物的性质进行预判，对化合物和其相关杂质的溶解度进行考察，以备选择正确的稀释液以及稀释液配比。

如果稀释液及其比例的选择不正确，会在分析方法建立之初及方法学验证阶段出现问题。

下面是稀释液配比不一致，造成回收率试验波动较大的典型案例：

准确度验证原方案

稀释剂

0.1mol/L盐酸-甲醇（1:9）

供试品

取本品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸5ml，超声5分钟使溶解，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀

杂质储备液

精密称取杂质对照品2mg，置10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸1ml使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（1000%）

对照品溶液

精密量取杂质储备液1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀

回收率溶液

取本品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸5ml，超声5分钟使溶解，放冷至室温，加适量甲醇后，分别精密加入杂质混合储备液各1ml、5ml、7.5ml，分别用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得20%-1、100%-1、150%-1回收率溶液。

说明

验证限度为0.5%

试验结果

分析原因

➜两次回收率结果检测不平行，重现性结果差异大。

➜增大称样量、增大移液体积、更换实验员操作，排除了人员仪器操作等因素。

➜分析实验方案，对比可知对照品溶液和回收率溶液溶剂配比不一致。

①空白溶剂：0.1mol/L盐酸-甲醇（1:9）

②对照品溶液溶剂配比：0.1M盐酸-甲醇（0.0005ml:0.9995）=（1:1999）

③100%回收率溶液溶剂配比：0.1M盐酸-甲醇（5.0005ml:44.9995）≈（1:9）

➜回收率偏高，原因分析：

对照品溶液中杂质峰面积偏小：杂质在0.1mol/L盐酸中易溶解，后步稀释采用甲醇稀释，可能会导致该杂质析出，从而使对照品峰面积偏小；因此会导致回收率偏大。

结论

杂质与API受溶解度影响较大，肉眼明视溶液澄清，但内在溶解性存在差异，导致回收率重现性差异较大。

验证试验

保障稀释液配比一致，后步稀释用稀释剂溶解。

杂质储备液

精密称取杂质对照品2mg，置10ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸1ml使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得（1000%）

对照品溶液

精密量取杂质储备液1ml，置10ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀

经验总结

➜各杂质与API溶解性在分析方法建立及验证中微妙变化会影响实验结果；

➜溶剂的选择、重现性验证在分析方法建立中尤为重要；

➜试验操作精准，排出操作误差、设备误差，更有利于结果分析判断。

温馨提示

主成分在稀释剂中的饱和溶解度，最好满足饱和溶解度大于3倍的供试品浓度！

责任编辑：三七

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