张涛高级工程师

重庆礼邦药物开发有限公司

执行董事、总经理

正高级工程师，重庆市首批“百名工程技术高端人才”、天津大学杰出校友、重庆医科大学硕士研究生导师、重庆市科技项目审评专家、重庆市仿制药一致性评价专家组专家、中国制药装备行业专委会专家、四川大学全球校友创业家生物制药联谊会第一届理事会理事等。先后在重庆制药五厂、第三军医大学、西南药业、太极集团、重庆医药工业研究院从事新药研发和管理。现任重庆礼邦药物开发有限公司执行董事、总经理，主要从事药物制剂关键技术及新产品研发、技术服务等技术和技术管理工作。主持完成科技部“十二五”重大新药创制专项子课题1项、参与科技部“十一五”新药创制重大专项子课题2项，完成十余项市级科技计划项目；完成数十项1、2、3、4（原5、6）类药品开发；获国外发明专利5件；获国内发明专利30余件。

盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型对制剂制备的影响

卜鑫珏1，张涛2，王驰1，夏喜坚2，陈国松2（1.重庆医科大学药学院，重庆400016；2.福安集团重庆礼邦药物开发有限公司，重庆401121）

摘要目的：研究盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型对制剂制备的影响，为其制剂开发及一致性评价提供理论基础。方法：采用X-射线粉末衍射（XRD）、红外分光光度（IR）和差式扫描量热（DSC）法鉴定盐酸乐卡地平的3种晶型；采用XRD法比较粉粹、研磨、加压工艺，湿法制粒中黏合剂溶剂（水、乙醇）和干燥温度（50、60、70℃）对盐酸乐卡地平3种晶型稳定性的影响；比较3种晶型盐酸乐卡地平片在水、盐酸、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液4种介质中的体外溶出度。结果：XRD显示，Ⅰ、Ⅱ晶型均有特征衍射峰，且2θ值不一致，无定型无特征衍射峰；IR显示，3种晶型具有不同的吸收强度和吸收峰数目；DSC显示，Ⅰ、Ⅱ晶型分别在194.6、207.3℃有明显吸热峰，无定型在86.1℃有明显吸热峰、299.8℃有放热峰。粉粹、研磨、加压及干燥温度对3种晶型转变均无影响；湿法制粒时水对晶型转变无影响，乙醇会引起Ⅰ晶型的晶型转变。除在盐酸中Ⅰ晶型与Ⅱ晶型片比较f2＝68外，4种介质中3种晶型盐酸乐卡地平片溶出度两两比较的f2均小于50。结论：XRD、IR、DSC法均能鉴定盐酸乐卡地平的3种晶型。用Ⅰ晶型制备盐酸乐卡地平片时，湿法制粒应避免使用乙醇作为黏合剂溶剂，建议使用水。不同晶型会影响所制盐酸乐卡地平片的体外溶出度。

关键词：盐酸乐卡地平；Ⅰ晶型；Ⅱ晶型；无定型；鉴定；稳定性；体外溶出

近年来，国际上对药物的多晶型现象十分重视，药品的不同晶型对药品的临床有效性、安全性、药品质量都有影响[1]。盐酸乐卡地平属于第三代二氢吡啶类钙离子拮抗药，是生物药剂学分类系统（BCS）Ⅱ类药品，已于2010年在中国上市，相对分子量为648.2。盐酸乐卡地平口服吸收好，药动学参数tmax为1.5～3h、t1/2β为2～5h，适用于轻、中度高血压的治疗，具有起效平缓、无耐受性、作用持久等特点[2]。目前已发现盐酸乐卡地平的晶型有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ晶型及无定型，其中无定型不稳定，但溶解度高；Ⅰ、Ⅱ晶型较其他晶型稳定，且Ⅱ晶型比Ⅰ晶型更稳定，但其溶解性不如Ⅰ晶型。本文对盐酸乐卡地平的Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型进行鉴定、稳定性、体外溶出等研究，以期为盐酸乐卡地平的制剂开发及一致性评价提供理论基础。盐酸乐卡地平的化学结构式见图1。

1 材料

1.1仪器

LC-20AD高效液相色谱仪、XRD-6000粉末衍射仪、傅里叶红外光谱（IR）仪、DTG-60H差式扫描量热（DSC）仪（日本岛津公司）。

1.2药品与试剂

盐酸乐卡地平原料药（Ⅰ晶型，批号：s160501，纯度：98.8％；Ⅱ晶型，批号：s160504，纯度：98.9％；无定型，批号：s160509，纯度：98.8％）和盐酸乐卡地平对照品（Ⅱ晶型，批号：s160528，纯度：98.7％，水分：0.53％）均由福安集团重庆礼邦药物开发有限公司提供；聚山梨酯80（重庆川东化工有限公司）；微晶纤维素（FMC）、乳糖（DMV）、羧甲基淀粉钠（CMS-Na）均购自法国罗盖特公司；聚乙烯吡咯烷酮（PVP）K30（美国亚什兰公司）；硬脂酸镁（安徽山河药用辅料有限公司）。

2 方法与结果

2.1含量测定

2.1.1 色谱条件色谱柱：Microspher C18（100mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.01mol/L三乙胺溶液-乙酸铵（650∶350∶1，冰醋酸调pH至6.0）；流速：1.0mL/min；检测波长：352nm；柱温：30℃；进样量：20μL。

2.1.2 专属性将空白辅料按比例制成空白片。取空白片和盐酸乐卡地平片各10片，分别置于250mL量瓶中，加0.01mol/L盐酸溶液25mL，超声使崩解，加甲醇100mL，超声并稀释至刻度，摇匀，滤过；取续滤液2mL，置于25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为空白辅料溶液和供试品溶液。精密称取盐酸乐卡地平对照品10mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10mL，置于100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。结果表明，盐酸乐卡地平的保留时间为（7.85±0.5）min，溶剂峰和辅料峰对其测定均无干扰，色谱图见图2。

2.1.3 线性关系、定量限、精密度、回收率分别将盐酸乐卡地平对照品制备成质量浓度为0.0080、0.0160、0.0256、0.0320、0.0480mg/mL的溶液，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以峰面积（A）对质量浓度（c）作线性回归，得回归方程为A＝1×107c+3563.8（r＝0.9999），表明盐酸乐卡地平检测质量浓度的线性范围为0.0080～0.0480mg/mL。定量限为0.56×10－3mg/mL；精密度RSD为0.14％（n＝6）；高、中、低水平盐酸乐卡地平溶液的回收率分别为99.7％、100.1％、98.6％（RSD分别为0.45％、0.21％、0.36％，n＝3）。

2.2 鉴定

2.2.1 XRD法采用XRD法分析盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型原料药，扫描范围（2θ）：3.00～50.00°，扫描方式：连续扫描，管流：40mA，管压：40kV，靶型：Cu，扫描速度：4.0deg/min，结果见图3。

由图3可知，Ⅰ晶型的主要2θ特征衍射峰分别位于5.34°、10.97°、14.17°、18.91°、21.50°、22.70°；Ⅱ晶型的主要2θ特征衍射峰分别位于9.53°、14.72°、16.20°、19.07°、20.81°、23.57°；无定型的衍射图谱为不规则图形，无特征衍射峰。与专利文献[3-4]中所载特征峰比较，可确定所测样品分别为盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型。这表明采用XRD法，根据特征峰的2θ值可对盐酸乐卡地平3种晶型进行鉴定。

2.2.2 IR法采用KBr压片法制样，IR法分析盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型原料药，光谱扫描范围为4000～400cm－1，结果见图4。

由图4可知，Ⅱ晶型在1701.1cm－1、Ⅰ晶型在1236.29cm－1、无定型在3500～3250cm－1处吸收峰有明显区别，表明可采用IR法对盐酸乐卡地平3种晶型进行鉴定。这可能是因为盐酸乐卡地平的3种晶型具有不同的晶格能，导致分子间作用力、作用方式及强度不同，从而造成吸收峰的缔合、移动，使吸收强度及吸收峰数目发生变化[5]。

2.2.3 DSC法分别取盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型原料药各5mg于铝坩埚中，采用DSC法进行分析。以空白铝坩埚为对照，升温速度：10℃/min，气氛：氮气（20mL/min），升温范围：30～350℃，结果见图5。

由图5可知，盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型分别在194.6℃和207.3℃处有明显吸热峰，均为熔点温度；无定型在86.1℃有明显吸热峰，为熔点温度，在299.8℃有放热峰，表明其化学结构已被破坏。这表明采用DSC法可对盐酸乐卡地平3种晶型进行鉴定。

2.3 稳定性考察

2.3.1 粉碎、研磨和加压对晶型的影响称取适量盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型原料药，分别进行气流粉碎（粉碎压力：4kg，进料压力：5kg）、研磨（玛瑙研钵内研磨0.5h）和压片（硬度约为10kg）后取样，采用XRD法进行分析。结果显示，经处理后盐酸乐卡地平无定型的XRD图谱均为不规则图形，无特征衍射峰出现；Ⅰ、Ⅱ晶型2θ值的测定结果见表1。

由表1可知，Ⅰ、Ⅱ晶型经处理后2θ值与处理前比较无明显变化，说明在上述处理条件下3种晶型均稳定，未发生晶型转变。

2.3.2 湿法制粒对晶型的影响

（1）黏合剂溶剂水、乙醇的影响。将盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型原料药分别与辅料（DMV、FMC、CMS-Na）按一定比例（不含硬脂酸镁）过筛混合均匀，分别以1％PVPK30水溶液、1％PVPK30乙醇溶液为黏合剂制备软材，过30目制粒，60℃烘干。将所得颗粒取样，进行XRD法分析。结果显示，经处理后无定型的XRD图谱均为不规则图形，无特征衍射峰出现；Ⅰ、Ⅱ晶型2θ值的测定结果见表2。

由表2可知，以PVPK30水溶液为黏合剂时，3种晶型均未发生晶型转变；以PVPK30乙醇溶液为黏合剂时，Ⅰ晶型发生晶型转变，无定型与Ⅱ晶型较稳定。

（2）干燥温度。将以PVPK30水溶液制得的盐酸乐卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及无定型颗粒，分别于50、60、70℃下烘干，干燥失重控制在2％。将所得的颗粒取样，进行XRD法分析。结果显示，经干燥后无定型的XRD图谱均为不规则图形，无特征衍射峰出现；Ⅰ、Ⅱ晶型2θ值的测定结果见表3。

由表3可知，Ⅰ晶型与Ⅱ晶型经处理后2θ值无明显差异，说明在上述条件下3种晶型均未发生晶型转变。

2.4 体外溶出度考察

2.4.1 溶出介质根据《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》，选用常规的4种溶出介质，分别为水、0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5醋酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液。由于盐酸乐卡地平原料药在上述4种介质中溶解度小，为保证其在溶液中溶解完全且制得的片剂在溶出介质中有良好的溶解梯度，故向4种溶出介质中加入0.3％的聚山梨酯80。

2.4.2 溶出方法按专利处方[6]，在同一工艺条件下，采用湿法制粒，片质量为100mg，压片硬度控制在4～6kg。照溶出度测定法，设溶出介质为900mL，转速为50r/min，介质温度为（37±0.5）℃，依法操作。分别在5、10、15、30、45min取样，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并采用外标法计算溶出度（％）。根据《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》，采用非模型依赖的相似因子（f2）法比较3种晶型制得的盐酸乐卡地平片在4种介质中的溶出度[7-8]，结果见表4。

美国FDA规定f2值在50～100时，可以认为两种处方制剂在同一释药条件下或同一处方制剂在不同释药条件下释药无差别[9-10]。由表4中f值可知，除在盐酸中Ⅰ晶型与Ⅱ晶型比较无差别外，3种晶型所制备片剂在4种溶出介质中的其他溶出行为均有明显差别。

3 讨论

本文采用XRD、IR、DSC法对盐酸乐卡地平的3种晶型进行鉴定，结果发现，晶型不同，药物分子在晶格上排列方式不同，从而造成晶格内部分子间作用力的差异，引起多晶型药物不同晶型间各种理化性质的变化。这提示应加强原料药的理化性质、参比制剂的处方组成及制剂工艺的研究，避免由于主成分理化性质不同或制剂因素所造成的疗效差异。对原料药的晶型进行比较，保证仿制药与原研药的原料药在疗效上具有等效性[11]。

盐酸乐卡地平3种晶型所制得片剂在4种溶出介质中溶出行为大多数均有明显差异，提示需要建立溶出度等制剂质量检查指标与不同晶型之间的相关关系。

固体药物大多是分子晶体，其晶格能差较小，容易发生转型。对于某些难溶性药物，由于稳定型的生物利用度低，不能满足临床需要；而亚稳定型表观溶解度高，可得到较高的生物利用度，因而选择亚稳定型作为目标晶型。这时，了解并掌握影响晶体稳定性因素，对合理设计处方、制订工艺方案，最大限度地减少低效、无效晶型的产生，使亚稳定型稳定化具有重要意义。同时，药品质量标准中必须建立能区分其晶型的溶出度试验方法，从而保证药品质量及临床药效，为仿制药一致性评价打下坚实的基础[12]。

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6月28日-30日，由药智网、中国药房杂志社联合主办的以“新时代的仿制药研发”为主题的“PDI”峰会——《第三届中国医药研发·创新峰会暨2018中国药品研发实力百强榜发布》将在重庆隆重举办，届时张涛将作为特邀嘉宾出席会议，并带来《口服仿制药开发及一致性评价技术创新策略探讨》的精彩报告，现将报告大纲分享如下，敬请期待~~

演讲题目：《口服仿制药开发及一致性评价技术创新策略探讨》

演讲内容简介：

1.讨论口服仿制药开发及一致性评价技术创新的痛点

2.解决方案及策略探讨

3.案列分享